دراسة البكتيريا لها أهمية عملية كبيرة للإنسان. حتى الآن ، تم اكتشاف عدد كبير من بدائيات النوى ، والتي تختلف عن بعضها البعض في الإمراضية ، ومنطقة التوزيع ، والشكل ، والحجم ، وعدد الأسواط ، وغيرها من المعلمات. لدراسة هذه السلالة بالتفصيل ، يتم استخدام طريقة البحث البكتريولوجي.
ما هي طرق تحليل الخلايا البكتيرية؟
لتحديد ما إذا كانت البكتيريا ممرضة ، يتم فحص الثقافة بطرق مختلفة. من بينها:
1. طريقة الجراثيم
2. الطريقة البكتريولوجية.
3. الطريقة البيولوجية.
تعتمد طرق البحث البكتيرية والبكتريولوجية مباشرة على العمل مع الخلايا بدائية النواة ، عندما يكون التحليل البيولوجي مطلوبًا لدراسة تأثير هذه الخلايا على الكائن الحي لحيوانات التجارب. وفقًا لدرجة ظهور علامات معينة للمرض ، يمكن للعالم أن يفعلاستنتاج حول وجود أو عدم وجود بكتيريا ممرضة في العينة ، وكذلك انتشارها بشكل طبيعي في جسم الحيوان للحصول على ثقافتها واستخدامها في أعمال أخرى.
تختلف طريقة البحث البكتريولوجية عن طريقة التنظير البكتيري. في الأول ، يتم استخدام ثقافة معدة خصيصًا من بدائيات النوى الحية للتحليل ، بينما في الثانية ، يتم العمل بالخلايا الميتة أو الحية على شريحة زجاجية.
مراحل طريقة البحث البكتريولوجي. علم الأحياء الدقيقة
يمكن أن يكون مبدأ دراسة خصائص الثقافة البكتيرية مفيدًا لكل من علماء الأحياء المجهرية الذين حددوا هدف دراسة الخلايا بدائية النواة ، وفنيي المختبرات الذين تتمثل مهمتهم في تحديد الإمراضية أو عدم الإمراضية للبكتيريا ، و ثم تشخيص المريض
تنقسم طريقة دراسة البكتيريا إلى ثلاث مراحل:
1. عزل البكتريا من العينة الاصلية
2. زرع البكتيريا وتنمي ثقافة نقية ، ودراسة خصائصها.
3. دراسة تفصيلية للخلايا البكتيرية.
المرحلة الأولى
يتم أخذ العينة أو اللطاخة من السطح الحر للوسيط أو من المريض. وهكذا نحصل على "كوكتيل" من أنواع عديدة من البكتيريا التي يجب أن تزرع على وسط غذائي. في بعض الأحيان يصبح من الممكن عزل البكتيريا الضرورية على الفور ، مع معرفة بؤر انتشارها في الجسم.
بعد يومين أو ثلاثة أيام ، يتم اختيار المستعمرات المطلوبة ويتم زرعها على وسائط صلبة من أطباق بتري بمساعدة حلقة معقمة. تعمل العديد من المعامل مع أنابيب الاختبار ، والتي قد تحتوي على وسط غذائي صلب أو سائل. هذه هي الطريقة التي يتم بها تنفيذ الطريقة البكتريولوجية للبحث في علم الأحياء الدقيقة.
المرحلة الثانية
بعد الحصول على المستعمرات الفردية للبكتيريا ، يتم إجراء تحليل كلي وميكروي مباشر. يتم قياس جميع معلمات المستعمرات ، ويتم تحديد لون وشكل كل منها. ليس من غير المألوف عد المستعمرات على طبق بتري ثم في مادة البداية. هذا مهم في تحليل البكتيريا المسببة للأمراض ، وعددها يعتمد على درجة المرض.
طريقة البحث البكتريولوجية ، المرحلة الثانية منها دراسة المستعمرات الفردية للكائنات الحية الدقيقة ، يمكن أن ترتبط بطريقة بيولوجية لتحليل البكتيريا. الهدف الآخر للعمل في هذه المرحلة هو زيادة كمية المواد المصدر. يمكن القيام بذلك على وسط غذائي ، أو يمكنك إجراء تجربة في الجسم الحي على الكائنات الحية التجريبية. سوف تتكاثر البكتيريا الممرضة ، ونتيجة لذلك ، سيحتوي الدم على ملايين الخلايا بدائية النواة. من السهل تحضير مواد العمل الضرورية للبكتيريا من الدم المأخوذ.
المرحلة الثالثة
أهم جزء من الدراسة هو تحديد الخصائص المورفولوجية والكيميائية الحيوية والسموم والمستضدية للثقافة البكتيرية. يتم تنفيذ العمل مع مزارع تم تنظيفها مسبقًا على وسط غذائي ، وكذلك مع المستحضرات (غالبًا ما تكون ملطخة) تحت المجهر.
تعيين الملكيةالبكتيريا المسببة للأمراض أو الانتهازية لمجموعة منهجية واحدة أو أخرى ، وكذلك لتحديد مقاومتها للأدوية ، يسمح بطريقة البحث البكتريولوجية. المرحلة 3 - المضادات الحيوية أي تحليل سلوك الخلايا البكتيرية في ظروف محتوى الأدوية في البيئة.
دراسة مقاومة المضادات الحيوية للثقافة ذات أهمية عملية كبيرة عندما يكون من الضروري وصف الأدوية الضرورية ، والأهم من ذلك ، الأدوية الفعالة لمريض معين. هذا هو المكان الذي يمكن أن تساعد فيه طريقة البحث البكتريولوجي.
ما هي وسيلة النمو؟
للتطور والتكاثر ، يجب أن تكون البكتيريا في وسط مغذيات معدة مسبقًا. من خلال الاتساق ، يمكن أن تكون سائلة أو صلبة ، وبحسب الأصل - نباتية أو حيوانية.
متطلبات الوسائط الأساسية:
1. العقم.
2. أقصى قدر من الشفافية.
3. المؤشرات المثلى للحموضة والضغط الاسموزي والنشاط المائي والقيم البيولوجية الأخرى.
الحصول على مستعمرات معزولة
1. طريقة Drygalsky. وهو يتألف من حقيقة أن اللطاخة بأنواع مختلفة من الكائنات الحية الدقيقة يتم تطبيقها على الحلقة البكتيرية. يتم تمرير هذه الحلقة على طول طبق بتري الأول بوسط غذائي. علاوة على ذلك ، بدون تغيير الحلقة ، يتم تنفيذ طريقة المواد المتبقية على أطباق بتري الثانية والثالثة. لذلك ، في العينات الأخيرة من المستعمرة ، لن يتم بذر البكتيريا بكثافة كبيرة ، وبالتالي تبسيط القدرة على العثور على العناصر الضرورية للعمل.البكتيريا.
2. طريقة كوخ. يستخدم أنابيب اختبار ذات وسط مغذي منصهر. يتم وضع حلقة أو ماصة بها مسحة من البكتيريا ، وبعد ذلك يتم سكب محتويات أنبوب الاختبار على طبق خاص. يتجمد أجار (أو الجيلاتين) بعد مرور بعض الوقت ، ومن السهل العثور على مستعمرات الخلايا المرغوبة في سمكها. من المهم تخفيف خليط البكتيريا في أنابيب الاختبار قبل بدء العمل حتى لا يكون تركيز الكائنات الحية الدقيقة مرتفعا جدا.
طريقة البحث البكتريولوجي ، والتي تعتمد مراحلها على عزل الثقافة المرغوبة للبكتيريا ، لا يمكنها الاستغناء عن هاتين الطريقتين لإيجاد مستعمرات معزولة.
المضاد الحيوي
بصريًا ، يمكن رؤية تفاعل البكتيريا مع الأدوية بطريقتين عمليتين:
1. طريقة قرص الورق.
2. تكاثر البكتيريا والمضادات الحيوية في وسط سائل
تتطلب طريقة القرص الورقي ثقافة الكائنات الحية الدقيقة التي نمت على وسط مغذي صلب. على مثل هذا الوسط ، ضع بضع قطع من الورق المستدير غارقة في المضادات الحيوية. إذا نجح الدواء في التعامل مع تحييد الخلايا البكتيرية ، فبعد هذا العلاج ستكون هناك منطقة خالية من المستعمرات. إذا كان رد الفعل تجاه المضاد الحيوي سلبيًا ، فإن البكتيريا ستبقى على قيد الحياة.
في حالة استخدام وسيط مغذٍ سائل ، قم أولاً بإعداد عدة أنابيب اختبار بها ثقافة بكتيريا مختلفة التخفيفات. يتم إضافة المضادات الحيوية إلى أنابيب الاختبار هذه ، ويتم ملاحظة عملية التفاعل بين المادة والكائنات الحية الدقيقة خلال النهار. نتيجة لذلك ، يتم الحصول على مضاد حيوي عالي الجودة ، والذي يمكن من خلالهاحكم على فعالية الدواء لمحصول معين.
مهام التحليل الرئيسية
هنا يسرد أهداف ومراحل طريقة البحث البكتريولوجية.
1. الحصول على مادة البداية التي سيتم استخدامها لعزل المستعمرات البكتيرية. يمكن أن تكون مسحة من سطح أي جسم أو غشاء مخاطي أو تجويف لعضو بشري ، اختبار دم.
2. زراعة الثقافة على وسط غذائي صلب. بعد 24-48 ساعة ، يمكن العثور على مستعمرات من أنواع مختلفة من البكتيريا في طبق بتري. نختار الشخص المطلوب وفقًا للمعايير المورفولوجية و / أو البيوكيميائية ونقوم بمزيد من العمل معها.
3. نشر الثقافة الناتجة. يمكن أن تعتمد طريقة البحث البكتريولوجي على طريقة ميكانيكية أو بيولوجية لزيادة عدد المزارع البكتيرية. في الحالة الأولى ، يتم العمل بوسائط مغذية صلبة أو سائلة ، حيث تتكاثر البكتيريا في منظم الحرارة وتشكل مستعمرات جديدة. تتطلب الطريقة البيولوجية ظروفًا طبيعية لزيادة عدد البكتيريا ، لذلك يصاب حيوان التجربة بالكائنات الحية الدقيقة. بعد بضعة أيام ، يمكن العثور على العديد من بدائيات النوى في عينة الدم أو اللطاخة.
4. العمل مع الثقافة النقية. لتحديد الوضع المنهجي للبكتيريا ، وكذلك انتمائها إلى مسببات الأمراض ، من الضروري إجراء تحليل شامل للخلايا وفقًا للخصائص المورفولوجية والكيميائية الحيوية. عند دراسة المجموعات المسببة للأمراض من الكائنات الحية الدقيقة ، من المهم أن تعرفما مدى فعالية المضادات الحيوية.
كانت هذه سمة عامة لطريقة البحث البكتريولوجي.
ميزات التحليل
القاعدة الرئيسية للبحث البكتريولوجي هي الحد الأقصى من العقم. إذا كنت تعمل بأنابيب اختبار ، فيجب إجراء عمليات زراعة البكتيريا وإعادة زراعتها فقط من خلال مصباح روح ساخن.
تتطلب جميع مراحل طريقة البحث البكتريولوجي استخدام حلقة خاصة أو ماصة باستور. يجب معالجة كلتا الأداتين مسبقًا في لهب مصباح كحولي. أما بالنسبة إلى ماصة باستور ، فقبل التعقيم الحراري ، من الضروري قطع طرف الماصة بالملاقط.
تقنية زرع البكتيريا لها أيضًا خصائصها الخاصة. أولاً ، عند التلقيح على وسائط صلبة ، يتم تمرير حلقة بكتيرية فوق سطح الأجار. بالطبع ، يجب أن تحتوي الحلقة بالفعل على عينة من الكائنات الحية الدقيقة على السطح. يُمارس التلقيح في وسط الاستزراع أيضًا ، وفي هذه الحالة يجب أن تصل الحلقة أو الماصة إلى قاع طبق بتري.
عند العمل مع الوسائط السائلة ، يتم استخدام أنابيب الاختبار. من المهم هنا التأكد من أن السوائل لا تلمس حواف الأواني الزجاجية أو السدادات المختبرية ، وأن الأدوات المستخدمة (الماصة ، الحلقة) لا تلمس الأجسام والأسطح الغريبة.
أهمية طريقة البحث البيولوجي
تحليل عينة البكتيريا له تطبيقاته العملية. في المقام الأوليمكن استخدام طريقة البحث البكتريولوجي في الطب. على سبيل المثال ، من الضروري دراسة البكتيريا الدقيقة للمريض من أجل تحديد التشخيص الصحيح ، وكذلك تطوير المسار الصحيح للعلاج. يساعد هنا المضاد الحيوي ، والذي سيظهر نشاط الأدوية ضد الممرض.
يستخدم تحليل البكتيريا في المختبر للكشف عن الأمراض الخطيرة مثل السل أو الحمى الراجعة أو السيلان. كما أنها تستخدم لدراسة التركيب البكتيري في اللوزتين وتجويف الأعضاء.
يمكن استخدام طريقة البحث البكتريولوجي لتحديد تلوث البيئة. وفقًا للبيانات المتعلقة بالتركيب الكمي والنوعي لمسحة من سطح الكائن ، يتم تحديد درجة تعداد هذه البيئة بواسطة الكائنات الحية الدقيقة.
