التهاب الكبد C هو عدوى تصيب الكبد يسببها فيروس Flaviviridae HCV ، والذي يتكون من جزيء واحد أو أكثر من جزيئات RNA. كقاعدة عامة ، يتم اتخاذ سلسلة من الإجراءات التشخيصية لإثبات التهاب الكبد الوبائي سي لدى المريض.إن تفاعل البوليميراز المتسلسل هو تحليل يؤكد التشخيص بدقة. غالبًا ما يتم تقديم الاستنتاج من قبل الأطباء عندما يكون لدى المريض بالفعل علامات المرض الأولى.
ما هو التهاب الكبد سي
تلف الكبد الناجم عن عدوى فيروسية تنتقل عن طريق الدم أو الاتصال الجنسي يسمى التهاب الكبد سي في الطب العامل المسبب هو فيروس يحتوي على الحمض النووي الريبي من العوامل المعدية غير الخلوية لعائلة Flaviviridae. يمكن للعدوى أن تبقى في الجسم لفترة طويلة دون أن تظهر نفسها. لذلك ، فقط عندما يتم الكشف عن كائن حي دقيق باستخدام اختبار الدم باستخدام PCR RNA RNA ، يعتبر التهاب الكبد C (كتشخيص) مبررًا.
لا يتم إنتاج Flavivirus في خلايا معزولة مزروعة صناعياً. في عملية التكاثر ، يُحدث العامل المعدي تعديلات مميزة مناعياً. هذه العوامل تمنع الجسم من العطاءاستجابة وقائية مناسبة ، ويواجه الخبراء صعوبة في تطوير لقاح فعال.
ينتقل الفيروس بالحقن. للعدوى ، يجب أن تدخل بكميات كافية مباشرة في مجرى الدم.
ما هي الاختبارات التي يتم إجراؤها لالتهاب الكبد سي
يتم تشخيص الأمراض الفيروسية للكبد باستخدام الفحوصات المخبرية. يتم إجراء الدراسات السريرية لالتهاب الكبد C من خلال دراسة المستضدات الأجنبية والخطيرة أو مركبات البروتين (الأجسام المضادة) في المادة الحيوية للمريض ، وخاصة في الدم.
- المقايسة المناعية الأنزيمية (ELISA). تعتمد الطريقة على الكشف عن الأجسام المضادة لـ lgM في الدم. يعتبر الغلوبولين المناعي الأكبر وهو خماسي. يتجلى في الاستجابة الوقائية الأولية للخلايا الليمفاوية لمادة أجنبية غير معروفة.
- المقايسة المناعية المشعة (RIA) - التحديد الكمي للغلوبولين المناعي lgM باستخدام نظير اليود المشع.
- PCR لالتهاب الكبد C - تحديد الحمض النووي الريبي الفيروسي في المادة الحيوية (الدم). هذا التحليل يؤكد التشخيص بشكل موثوق.
اختبار IgG غير موثوق به. يمكن أن يشير وجوده في مصل الدم ليس فقط إلى وجود فيروس فلافي ، ولكن أيضًا إلى عدوى سابقة أخرى لها نفس العامل الممرض.
ما الذي يحدد تحليل PCR
يعتمد تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) على تحديد مناطق الحمض النووي الخاصة ببعض مسببات الأمراض في عينات من المواد للبحث (الظهارة والدم).يتيح التحليل تحديد أصغر الكائنات المسببة للأمراض (الفيروسات) عن طريق الكشف عن الحمض النووي الريبي أو الحمض النووي في المواد البيولوجية.
إجراء مخبري للكشف عن الأجسام المضادة يتم تنفيذ التهاب الكبد الوبائي C PCR في 3 مراحل:
- حدد. يتم تنقية المادة الحيوية المدروسة من الشوائب ويتم الحصول على الحمض النووي في الطور المتحرك للعمود الكروماتوغرافي.
- التضخيم. يتم إجراء التحليل في جهاز تدوير جهاز ترموستات. يقوم بتسخين وتبريد أنابيب الاختبار مع دورية معينة. لدراسة واحدة ، يتم إجراء ما يصل إلى 35 دورة. والنتيجة هي عدد كاف من شظايا الحمض النووي لاكتشاف وتحديد وتقييم العامل الممرض.
- الكهربائي. يتم وضع الشظايا الناتجة في هلام مع تشبع مختلف من الاغاروز ويتم إجراء الفصل الكهربائي. يتم تحليل المخطط الكهربائي الناتج على جهاز كمبيوتر.
لا يتم استخدام دراسة PCR القياسية فحسب ، بل يتم أيضًا استخدام تحليل PCR في الوقت الفعلي. هذا هو التشخيص في الوقت الحقيقي. تسمح الطريقة بالتحليل الكمي والنوعي ، مما يجعل من الممكن تحديد تكوين وديناميات المرض ، وكذلك وصف العلاج الذي يهدف إلى القضاء على سبب أصل علم الأمراض. يستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي أيضًا لتحديد الثقافة النقية للعوامل المعدية (التنميط الجيني).
كيف يتم اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل
للتشخيص ، يمكن استخدام أي سائل بيولوجي بشري. عادة ما تكون المادة الحيوية لاختبار التهاب الكبد سي هي الدم.
يتم أخذ العينات للتشخيص في الإجراء الإجرائيمكتب. لسحب الدم ، استخدم أنابيب اختبار يمكن التخلص منها مع مادة تمنع تخثر الدم. الأنشطة التي تركز على منع انتشار العوامل المعدية تساعد على تجنب دخول سلالة أخرى من الكائنات الحية الدقيقة من الخارج.
يؤخذ دم من أجل تفاعل البوليميراز المتسلسل من التهاب الكبد سي في الصباح على معدة فارغة. يتم إرسال العينة على الفور إلى المختبر. يُسمح بتخزين المادة الحيوية عند درجة حرارة +4 إلى +8 درجة مئوية. يتم تمييز الحاويات وتزويدها بالإرشادات. نتائج الاختبار متاحة في غضون 48 ساعة ، وأحيانًا قبل ذلك.
أنواع PCR
نطاق تطبيق تفاعل البلمرة المتسلسل واسع جدًا. يحدد خبراء العدوى استخدام التهاب الكبد B ، والأمراض التي تنتقل عن طريق الحشرات الماصة للدم ، والإيدز ، والسل. في علم الأورام باستخدام هذه الطريقة يتم الكشف عن الخلايا السرطانية في مرحلة مبكرة
هناك حوالي أربعة عشر نوعًا من التحليل. يعتمد استخدام نوع أو آخر على النطاق والنتائج النهائية للتحليلات. بعض أنواع PCR لا غنى عنها حيث تكون النتيجة مطلوبة في غضون 20 دقيقة.
لتشخيص التهاب الكبد C ، يتم استخدام 3 أنواع من تفاعل البلمرة المتسلسل:
- يمكن أن يكون التقييم النوعي إما إيجابيا ، مما يشير إلى وجود عدوى في الجسم ، أو سلبي ، مما يشير إلى عدم وجود فيروس فلافي.
- PCR في الوقت الحقيقي (التحليل الكمي) - يحدد الحمض النووي الريبي الكمي للعامل الممرض في وحدة دولية / مل.
- التنميط الجيني هو تحليل يكشف عن نوع (النمط الجيني) للفيروس.
لتحديد وتحديد المرض بدقة ، تليهاتستخدم جميع أنواع الدراسات الثلاثة لوصف العلاج الأمثل.
تحليل تفاعل سلسلة البوليميراز النوعي
التحليل إلزامي لكل من لديه ELISA الذي اكتشف الأجسام المضادة لـ HCV. اختبار PCR النوعي لالتهاب الكبد C هو اختبار الحساسية القياسي. تهدف الطريقة فقط إلى الكشف ، ولا يتم إجراء عد أو عزل للمواد الأخرى.
للكشف عن الأجسام المضادة ، يتم استخدام أنظمة اختبار خاصة مع حد حساسية لا يقل عن 50 وحدة دولية / مل. إذا تم الكشف عن الأجسام المضادة ، يتم وصف اختبارات توضيح أخرى. إذا كانت النتيجة سلبية ، فلن يتم إجراء المزيد من الاختبارات.
في بعض الحالات ، قد تكون النتيجة السلبية الخاطئة بسبب طاقم المختبر غير الأكفاء أو الكواشف ذات الجودة الرديئة. بالنسبة للتأمين ، من الأفضل إعادة إجراء التحليل في مكان آخر.
الكمي PCR
يتم استخدام الطريقة لدراسة عدد الفيروسات المصفرة مباشرة في دورة تفاعل واحدة. للقياس الدقيق ، يتم استخدام شظايا الحمض النووي المستخدمة في التهجين أو الاشعال المسمى الفلورسنت. يوجد خيار كشف اقتصادي باستخدام صبغة SYBL Green. يتم تثبيت الصبغة في أخدود صغير في الحمض النووي وتتحول إلى اللون الأزرق عند تشعيعها بالليزر.
يتم تحديد التركيز بواسطة مضخم الجهاز في المكافئ الرقمي. قد تختلف القيم قليلاً بين المعامل ولذلك يجب مقارنتها بالقيم المرجعية.
الكمي PCRيساعد التهاب الكبد الوبائي سي على اختيار الجرعة المثلى للأدوية وتحديد مدة العلاج. يعتمد تكرار الدراسة على مرحلة المرض ونوع التركيب الجيني ومسار العلاج المحدد.
تحديد النمط الجيني
فيروس التهاب الكبد الوبائي سي له تركيبة وراثية متغيرة. تجعل العديد من التعديلات من المستحيل إنشاء لقاح ، كما أنها تعقد العلاج. تم تحديد وتسجيل ما مجموعه 11 نمطًا وراثيًا و 100 نوع فرعي. في بلدان الاتحاد السوفياتي السابق ، في الأشخاص المصابين بالتهاب الكبد C ، يكتشف تفاعل البوليميراز المتسلسل بشكل أساسي الأنماط الجينية 1b و 3.
في وجود أي من الأنماط الجينية يمكن أن يسبب تليف الكبد أو سرطان الكبد المرح. هذا هو السبب في أهمية اكتشاف الفيروس في الوقت المناسب.
بالنسبة لبعض المرضى ، تعتبر بعض الأدوية المصممة لمحاربة التهاب الكبد الفيروسي سامة. يسمح لك التنميط الجيني بتحديد نوع البروتين ووصف دواء فعال.
في نتائج اختبارات الكتابة يوجد رقم بحرف لاتيني صغير يشير إلى النمط الجيني للفيروس. إذا تم الكشف عن فيروس التهاب الكبد الوبائي ولكن لم يتم كتابته ، فهذا يعني أن الشخص لديه نمط وراثي غير نموذجي لمنطقة جغرافية معينة.
نتائج التحليل
يتعامل الطبيب مع فك النتائج. فقط البيانات من العديد من الدراسات (جنبًا إلى جنب مع سوابق المريض والفحص) يمكن أن تعطي صورة حقيقية شاملة للتاريخ الطبي.
- في الشخص السليم ، لا يكشف اختبار التفاعل النوعي في المادة الحيوية عن أي شيء. إذا تمت الإشارة إلى القيمة "المكتشفة" ، يتم تأكيد الإصابة والمريضيحتاج إلى مزيد من التشخيص يتبعه العلاج.
- تحديد عدد العوامل المعدية يجعل من الممكن تقييم الحمل الفيروسي على الجسم. عادة ، لا يكتشف تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي لالتهاب الكبد الوبائي العامل الممرض. يعتبر المؤشر الذي يصل إلى 810 ^ 5 حمولة منخفضة ، ومع العلاج المناسب ، يضمن نتيجة إيجابية. تتطلب القيم الأعلى فحصًا متعمقًا وتحديد العلاج طويل الأمد ، والنتيجة الإيجابية التي لا يمكن لأحد أن يضمنها.
- تشير نتائج التنميط الجيني الإيجابية إلى النمط الجيني المعترف به. النتيجة السلبية تشير إما إلى عدم وجود الفيروس المصفف أو وجود نمط وراثي غير نموذجي لهذه المنطقة.
ما الذي يشير إليه اختبار PCR الإيجابي
أي مرض خطير يتطلب تشخيصا شاملا. يؤكد التهاب الكبد الوبائي سي بي سي آر الإيجابي التشخيص ، ولكن لا يمكن التنبؤ إلا بعد دراسات معملية ودراسات مفيدة إضافية.
الكشف عن الفيروس لا يعطي صورة كاملة عن علم الأمراض. من الضروري تحديد نوعه وطبيعته ، لتحديد كيفية تأثيره على الكبد والأعضاء الأخرى. غالبًا ما يكون للاكتشاف المبكر لفيروس التهاب الكبد (سي) نتائج علاجية إيجابية.
PCR سلبي مع ELISA إيجابي
عند ملاحظة الأعراض المميزة لتلف الكبد ، هناك احتمال كبير بأن العدوى قد دخلت الجسم بالفعل. لذلك ، يجب عليك الاتصال بأخصائي أمراض الكبد أو أخصائي الأمراض المعدية. خلال المقابلات ، سيقوم الأخصائي بجمع سوابق المريض ووصف الفحص اللازم.
إذانتائج الدراسات حول التهاب الكبد الوبائي سي بي سي آر سلبية ، والمقايسة المناعية للإنزيم إيجابية ، وهذا يشير إلى وجود أجسام مضادة لفيروس فلافيف في الدم. يحدث هذا عادة عندما تدخل العدوى الجسم بكمية قليلة ، فيتعامل معها الجهاز المناعي من تلقاء نفسه. لكن هؤلاء الأشخاص لا يزالون يعتبرون مصابين ويلزم فحصهم كل 6 أشهر. إذا ، مع نتائج الاختبار هذه ، يُحرم الشخص من إجراء فحص طبي مجاني ، فمن الأفضل أن يأخذ PCR مقابل رسوم للحفاظ على صحته ، وإذا كانت النتائج إيجابية ، فاتصل بأخصائي للتشخيص والعلاج.
مزايا وعيوب الطريقة
عند تحديد تشخيص التهاب الكبد الوبائي سي ، فإن تفاعل البوليميراز المتسلسل له عدة مزايا:
- الكشف المبكر عن الممرض
- تعريف دقيق للفيروس
- كفاءة التشخيص
- الحد الأدنى لمعدل الخطأ.
- حساسية عالية
عيوب الطريقة:
- تكلفة عالية للتحليل. يتطلب الاختبار معدات باهظة الثمن وكواشف وطاقم طبي مؤهل تأهيلا عاليا. كل ذلك معًا يصل إلى مبلغ كبير.
- متطلبات صارمة لنقل المواد الحيوية
علاج التهاب الكبد
يعتبر تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل لفيروس التهاب الكبد الوبائي سي أساسيًا للتشخيص ، ولكنه ليس نهائيًا. لكي يكون العلاج فعالًا ، يلزم إجراء عدد من الدراسات المختبرية والأدوات الإضافية. بعد اجتياز كل شيءاجراءات تشخيصية يصف الطبيب العلاج:
- يتم وصف النظام الغذائي رقم 5.
- الكحول مستبعد تماما
- استقبال مشترك للإنترفيرون وريبافيرين لمدة 25 يومًا.
- دورات مستشاري الكبد "Essentiale" و "Karsil" و "Phosphogliv".
- في حالات خاصة ، يتم استخدام فصل البلازما.
يتم استخدام الأدوية التي يصفها طبيب الكبد بانتظام ، دون تغيير الجرعة. يتم تحديد مدة تناول الأدوية من قبل الطبيب بعد اجتياز اختبارات المراقبة. بعد الانتهاء من دورة العلاج يجب زيارة الطبيب كل ستة اشهر
تسمح تشخيصات تفاعل البوليميراز المتسلسل بتحديد العامل المسبب لالتهاب الكبد سي في مرحلة مبكرة. هذا يساهم في فعالية العلاج والوقاية من انتقال المرض إلى أشكال خطيرة مثل تليف الكبد وسرطان الخلايا الكبدية.
